分子生物学及基因工程实验教程

章节摘录

　　第一部分　基础性实验　　实验1　质粒的分离——碱性SDS法　　【实验目的】　　1.学习碱法分离质粒的基本原理。　　2.掌握碱法分离质粒的操作方法。　　【实验原理】　　质粒（plasmid）是染色体之外裸露的、具有自主复制能力的、以超螺旋状态存在于细胞内的双链DNA分子。质粒的分离是分子生物学研究中最基本的技术，目前提取质粒的方法很多，比如CsC1梯度离心法、煮沸法、硅石粉法、碱性SDS法等。本实验所用的碱性SDS法（简称碱法）是一种经典的分离质粒DNA的方法，其基本原理是利用染色体DNA与质粒DNA在变性程度和复性速度差异，即在pH>12的碱性条件下，大肠杆菌的线性染色体由于氢键断裂，双螺旋结构解开而变性，但在该条件下，质粒由于其共价闭合环状超螺旋结构特点，两条互补链间的氢键没有完全破坏，两条链仍然部分地结合在一起，当将溶液的pH调至中性时，质粒DNA会快速复性，染色体DNA则由于分子很大，难以复性，在高盐溶液中，变性的染色体DNA相互缠绕，形成不溶性DNA－蛋白质－SDS大分子复合体，与细胞碎片一起被离心除去，而质粒DNA存留在上清液中，可用异丙醇或乙醇沉淀上清溶液中的质粒DNA，获得纯度较高的质粒。　　【实验器材、材料与试剂】　　1.器材　　恒温摇床、超净工作台、高压灭菌锅、高速台式离心机、微量取液器、Tip头、1.5 ml Eppendorf管。　　2.材料　　含pUC18质粒的大肠杆菌DH5a或JM109菌株。　　3.试剂　　（1）LB液体培养基　　称取胰蛋白质胨10g、酵母提取物5g、NaCl 10g溶于950ml水中，用0.4 mol／LNaOH调节pH至7.0，定容至1L，高温高压灭菌。　　……

书籍目录

第一部分　基础性实验实验1　质粒的分离——碱性SDS法实验2　Silica硅石粉法纯化质粒实验3　离心柱法提取质粒DNA实验4　质粒的提取——煮沸法实验5　核酸琼脂糖凝胶电泳及“玻璃奶”法纯化回收DNA片段实验6　离心柱法回收琼脂糖凝胶中DNA片段实验7　DNA片段的连接（向质粒载体中插入外源DNA）实验8　E.coLi感受态细胞的制备、转化及转化子的鉴定（蓝白斑筛选法）实验9　聚合酶链式反应（PCR）技术实验10　菌落PCR方法快速筛选细菌重组子实验11　重组子的插入方向鉴定（酶切法）实验12　噬菌体铺板实验13　M13噬菌体DNA的提取实验14　SDS法小量提取植物基因组DNA实验15　CTAB法小量提取植物基因组DNA实验16　动物组织细胞基因组DNA提取实验17　血液基因组DNA的纯化分离实验18　Trizol试剂快速提取（动）植物总RNA实验19　总RNA的变性琼脂糖凝胶电泳检测第二部分　综合性实验实验20　反转录PCR实验21　植物启动子表达的组织特异性——β-葡萄糖醛酸糖苷酶（GUS）组织化学染色实验22　外源基因在原核细胞中表达及分析——谷胱甘肽S-转移酶融合蛋白质的表达及纯化实验23　外源基因在原核细胞中表达及分析——His6标记蛋白质的原核表达和纯化实验24　Western-blotting分析实验25　高灵敏Western-blotting分析（化学发光法）第三部分　研究性实验实验26　地高辛标记探针的Southern杂交实验27　菌落原位杂交实验28　转基因植物的PCR检测实验29　花序浸泡法转化拟南芥及转化子的筛选实验30　叶盘法转化烟草参考文献

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　　《能力培养型生物学基础课系列实验教材：分子生物学及基因工程实验教程》是“生物学基础课系列实验教材”之一，全书共分3个部分，收录了30个实验，对基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术作了系统介绍。具体包括Silica硅石粉法纯化质粒、聚合酶链式反应（PCR）技术、动物组织细胞基因组DNA提取、反转录PCR、地高辛标记探针的Southern杂交等。该书可供各大专院校作为教材使用，也可供从事相关工作的人员作为参考用书使用。

作者简介

《能力培养型生物学基础课系列实验教材·分子生物学及基因工程实验教程》介绍了基本的、常用的分子生物学和基因工程实验技术。全书分为三部分，第一部分为基础性实验，针对分子生物学基本实验技能的培养，主要介绍一些短小独立的分子生物学和基因工程基本实验方案，由于每个实验可在半日内完成，并且成功率较高，这些实验特别适合于本科实验教学的日程安排。第二部分为综述性实验，实验略微复杂，适合于高年级本科生。第三部分为研究性实验，实验内容贴近科研工作，以培养独立科研能力为主要目的。

图书封面

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