遗传修饰小鼠实用实验技术

章节摘录

版权页：   插图：   （2）小鼠ES细胞的解冻 程序：①向150cm2和25cm2的培养瓶中加入3ml和10ml 0.1％明胶，均匀地铺满培养表面，室温30rain，注意勿产生气泡；②吸弃明胶，向150cm2培养中加入30m1EF培养液；③取出一管冻存MMC处理的EF细胞，放在37℃水浴中解冻，约一半细胞解冻后转入超净台中，用酒精棉球擦拭管口边缘和管底；④将细胞转移到EF培养液中，再吸出少量培养液洗净冻存管；⑤混匀，向25cm2培养瓶中转移5ml细胞悬液，37℃培养8h以上可接种EF细胞；⑥一管EF细胞可接种6块96孔板（每孔100μl），3块24孔板（每孔 1mJ）；⑦在37℃水浴解冻一管ES细胞，大约一半细胞融化时取出，转人超净台，用酒精棉球擦拭管口边缘和管底；⑧将解冻的细胞转人加有10ml ES培养液的15ml离心管中，吸2ml培养液洗冻存管1次；⑨室温离心1000r／min，3min；⑩弃上清，敲击管底使细胞重悬，加入50μl ES培养液进一步悬浮细胞；吸弃25cm2培养瓶中的EF培养液，把ES细胞接种于EF细胞上。 （3）小鼠ES细胞的冻存方法：①准备冻存液，90％FCS.10％DMSO，过滤除菌，4℃保存，24h内使用，新配的冻存液会产热，所以需水浴降温后才能使用；②吸弃培养液，用PBS洗1次；③加入胰酶／EDTA，37℃，5 min；④敲打培养皿使细胞悬浮，加入10m1 ES培养液，吹打使细胞进一步重悬，取10μl细胞悬液计数细胞；⑤室温离心1000r／min，5min；⑥吸弃上清，敲打培养使细胞重悬；⑦加入冻存液重悬细胞，5×106／ml；⑧分装入冻存管，每管1ml，写好标签，放在冰上5min；⑨将细胞放入盒中，放在—70℃过夜，转入液氮中保存。 3.小瓶ES细胞的建株 （1）材料准备包括：①发育3.5dpc的小鼠囊胚，或者“滞育”囊胚；②M2培养液，或者DMEM加10％胎牛血清和25mM HEPES（pH7.4）；③lOmm培养板；④饲养细胞（STO细胞或小鼠MEF细胞）；⑤ES细胞培养液；⑥前端拉尖并封闭的玻璃点滴管；⑦无钙镁PBS；⑧胰酶／EDTA（胰酶0.25％～0.5％，EDTA 0.2％，用PBS配制）；⑨液状石蜡。 （2）操作过程包括以下几个步骤。

书籍目录

第一章  小鼠的胚胎发育简介
  第一节  实验室小鼠概述
  第二节  生殖细胞的发生和受精
  第三节  卵裂和小鼠胚胎的早期分化
  第四节  原肠胚发生
  第五节  早期器官发生
  第六节  胚外组织的发育
第二章  实验室小鼠的饲养、管理及一般操作
  第一节  实验室小鼠的饲养条件和注意事项
  第二节  遗传修饰小鼠的品系特征
  第三节  小鼠的交配
  第四节  遗传修饰小鼠实验中常用的几种手术
第三章  转基因小鼠的建立
  第一节  转基因载体的构建
  第二节  受精卵的采集和培养
  第三节  受精卵的显微注射
第四章  基因剔除小鼠的建立
  第一节  小鼠基因剔除概述
  第二节  基因剔除载体的设计与构建
  第三节  Es细胞的培养与建株
  第四节  在小鼠胚胎干细胞中进行基因打靶
  第五节  小鼠囊胚的显微注射
第五章  转基因和基因剔除小鼠的分析
  第一节  小鼠基因型的判定
  第二节  常用的基因表达检测方法
  第三节  组织切片的制作和染色
  第四节  特殊组织的表型分析
第六章  常用小鼠疾病模型建立
  第一节  荷瘤小鼠模型
  第二节  哮喘小鼠模型
  第三节  小鼠肝脏部分切除模型
  第四节  小鼠肝脏缺血再灌注损伤模型
  第五节  小鼠纤维化模型的建立
  第六节  视网膜病变模型

编辑推荐

《遗传修饰小鼠实用实验技术》给读者和使用者从事相关实验研究提供成熟、全面的实验操作指导与参考。

作者简介

《遗传修饰小鼠实用实验技术》，本书分六章，第一章小鼠的胚胎发育概论，第二章实验室小鼠的饲养、管理及一般操作，第三章转基因小鼠的建立，第四章基因剔除小鼠的建立，第五章转基因和基因剔除小鼠的分析，第六章常用小鼠疾病模型建立。

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